NeuralCipher Araştırma özeti
Kaynak özetin Türkçe makine çevirisi. Klinik kullanım öncesinde özgün yayınla karşılaştırılmalı; hekim incelemesi değildir. cc by
Oksidatif stres ve mitokondriyal disfonksiyon, Parkinson hastalığında (PD) dopaminerjik nöronların kaybıyla ilişkili önemli biyokimyasal olayları ifade eder. İn vitro ve in vivo PD modellerini veya hasta hastalardan dokuları kullanan çalışmalar, mitokondriyal NADH dehidrojenazın (OXPHOS elektron taşıma zincirinin Kompleks I) nöronal ölüme yol açan normal mitokondriyal fizyolojiyi etkileyen seçici bir inhibisyonu göstermiştir. Daha önceki bir çalışmada, dopaminerjik hücrelerdeki glutatyon tükenmesi nedeniyle oksidatif stresin, PD'nin bir özelliği olan, sistein tiol oksidasyonu yoluyla Kompleks I inhibisyonuna yol açtığını gösterdik (Jha ve ark. (2000) J. Biol. Chem. 275, 26096-26101). Kompleks I, en az 45 protein alt biriminden oluşan iç mitokondriyal zarı kapsayan yaklaşık 980-kDa multimerik bir enzimdir. PD için bir kemirgen hastalığı modeli kullanarak Kompleks I'deki modifikasyonları araştırmak için ön koşul olarak, Kompleks I'i fare beyninden ve kültürlü bir sıçan mesensefalik dopaminerjik nöronal hücre hattından izole etmek için sükroz gradyan fraksiyonasyonuna ve immünopresipitasyonuna dayanan iki bağımsız hızlı ve hafif izolasyon prosedürü geliştirdik. Her iki protokol de I. Kompleksi az miktarda kemirgen dokusundan ve hücre kültürlerinden arındırabilir. Mavi Yerli jel elektroforez, tek boyutlu ve iki boyutlu SDS-PAGE, izole edilmiş Kompleks I'in saflığını ve bileşimini değerlendirmek için kullanıldı ve ardından kapsamlı kütle spektrometrik karakterizasyonu yapıldı. Toplamda, 45 kemirgen kompleksi I alt biriminden 41'i MS / MS dizi kapsamına ulaştı. Bilgimize göre, bu çalışma nöronal Kompleks I proteinlerinin ilk ayrıntılı kütle spektrometrik analizini sağlar ve mitokondriyal disfonksiyonla ilişkili patolojilerde sistein oksidasyonu ve diğer posttranslasyonel modifikasyonların rolünü araştırmak için bir araç sağlar.
Özgün kaynak özetini okuyun
Oxidative stress and mitochondrial dysfunction signify important biochemical events associated with the loss of dopaminergic neurons in Parkinson's disease (PD). Studies using in vitro and in vivo PD models or tissues from diseased patients have demonstrated a selective inhibition of mitochondrial NADH dehydrogenase (Complex I of the OXPHOS electron transport chain) that affects normal mitochondrial physiology leading to neuronal death. In an earlier study, we demonstrated that oxidative stress due to glutathione depletion in dopaminergic cells, a hallmark of PD, leads to Complex I inhibition via cysteine thiol oxidation (Jha et al. (2000) J. Biol. Chem. 275, 26096-26101). Complex I is a approximately 980-kDa multimeric enzyme spanning the inner mitochondrial membrane comprising at least 45 protein subunits. As a prerequisite to investigating modifications to Complex I using a rodent disease model for PD, we developed two independent rapid and mild isolation procedures based on sucrose gradient fractionation and immunoprecipitation to isolate Complex I from mouse brain and a cultured rat mesencephalic dopaminergic neuronal cell line. Both protocols are capable of purifying Complex I from small amounts of rodent tissue and cell cultures. Blue Native gel electrophoresis, one-dimensional and two-dimensional SDS-PAGE were employed to assess the purity and composition of isolated Complex I followed by extensive mass spectrometric characterization. Altogether, 41 of 45 rodent Complex I subunits achieved MS/MS sequence coverage. To our knowledge, this study provides the first detailed mass spectrometric analysis of neuronal Complex I proteins and provides a means to investigate the role of cysteine oxidation and other posttranslational modifications in pathologies associated with mitochondrial dysfunction.
Bilimsel değerlendirme
Araştırma sorusu
Sorunun kapsamı orijinal çalışma üzerinden değerlendirilir.
Yöntem ve örneklem
Çalışma tasarımı ve örneklem için kaynak makaleyi kontrol edin.
Temel bulgular
Bu kayıt için editoryal olarak onaylanmış bulgu özeti henüz yayımlanmadı.
Sınırlılıklar
Sonuçların genellenebilirliği, yanlılık ve klinik anlamı ayrıca incelenmelidir.
Bibliyografik veriden yöntem, örneklem veya klinik sonuç çıkarımı yapılmaz.