Identification of novel proteins associated with both alpha-synuclein and DJ-1.

Araştırma özeti

Kaynak özetin Türkçe makine çevirisi. Klinik kullanım öncesinde özgün yayınla karşılaştırılmalı; hekim incelemesi değildir. cc by

Parkinson hastalığında (PD) nörodejenerasyona yol açan moleküler mekanizmalar zor olsa da, birçok kanıt çizgisi, PD patogenezindeki iki kritik protein olan alfa-sinüklein ve DJ-1'in birbirleriyle işlevsel olarak etkileşime girdiğini göstermiştir. Alfa-sinükleinin DJ-1 ile doğrudan etkileşime girip girmediği konusundaki soruşturma tartışmalıdır. Mevcut çalışmada, alfa-sinüklein ve/veya DJ-1 ile ilişkili proteinleri, hücre kültüründeki amino asitler tarafından kararlı izotop etiketleme adı verilen sağlam bir proteomik teknikle (SILAC) rotenone karşı kontrollere maruz kalan dopaminerjik MES hücrelerinde analiz ettik. Alfa-sinüklein ve DJ-1 ile ilişkili protein komplekslerinde sırasıyla 324 ve 306 protein tespit ettik. Alfa-sinüklein-ilişkili proteinler arasında, 141 protein, rotenon tedavisinden sonra göreceli bollukta önemli değişiklikler (artırma veya azalma) gösterdi; DJ-1 ile ilişkili proteinler arasında 119 protein, rotenon tedavisinden sonra göreceli bollukta önemli değişiklikler gösterdi. Alfa-sinüklein ve DJ-1 arasında doğrudan bir etkileşim gözlemlenmemiş olsa da, afinite saflaştırması ile kütle spektrometrisi veya daha sonra doğrudan ko-immünopresipitasyon ile analiz edilip edilmediği, 144 proteinin hem alfa-sinüklein hem de DJ-1 ile ilişkili olduğu görülmüştür. Bunlardan 114 protein, alfa-sinüklein, DJ-1 veya her ikisi ile ilişkili komplekslerdeki göreceli bollukta önemli değişiklikler gösterdi. Bu proteinlerin (mortalin, nükleolin, grp94, kalnexin ve klathrin) bir alt kümesi, hem alfa-sinüklein hem de DJ-1 ile konfokal mikroskopi, Western blot ve / veya immünopresipitasyon kullanarak ilişkileri için daha da doğrulandı. Bu nedenle, alfa-sinüklein ve DJ-1 arasında doğrudan bir etkileşim olmadığını doğrulamakla kalmadık, aynı zamanda ilk kez bu beş yeni proteinin hem alfa-sinüklein hem de DJ-1 ile ilişkilendirildiğini bildirdik. Bu kenetlenme proteinlerinin daha fazla karakterizasyonu, muhtemelen DJ-1'in alfa-sinüklein fonksiyonunu modüle ettiği mekanizmalara daha fazla ışık tutacak ve tam tersi, PD ayarında.

Özgün kaynak özetini okuyun

The molecular mechanisms leading to neurodegeneration in Parkinson disease (PD) remain elusive, although many lines of evidence have indicated that alpha-synuclein and DJ-1, two critical proteins in PD pathogenesis, interact with each other functionally. The investigation on whether alpha-synuclein directly interacts with DJ-1 has been controversial. In the current study, we analyzed proteins associated with alpha-synuclein and/or DJ-1 with a robust proteomics technique called stable isotope labeling by amino acids in cell culture (SILAC) in dopaminergic MES cells exposed to rotenone versus controls. We identified 324 and 306 proteins in the alpha-synuclein- and DJ-1-associated protein complexes, respectively. Among alpha-synuclein-associated proteins, 141 proteins displayed significant changes in the relative abundance (increase or decrease) after rotenone treatment; among DJ-1-associated proteins, 119 proteins displayed significant changes in the relative abundance after rotenone treatment. Although no direct interaction was observed between alpha-synuclein and DJ-1, whether analyzed by affinity purification followed by mass spectrometry or subsequent direct co-immunoprecipitation, 144 proteins were seen in association with both alpha-synuclein and DJ-1. Of those, 114 proteins displayed significant changes in the relative abundance in the complexes associated with alpha-synuclein, DJ-1, or both after rotenone treatment. A subset of these proteins (mortalin, nucleolin, grp94, calnexin, and clathrin) was further validated for their association with both alpha-synuclein and DJ-1 using confocal microscopy, Western blot, and/or immunoprecipitation. Thus, we not only confirmed that there was no direct interaction between alpha-synuclein and DJ-1 but also, for the first time, report these five novel proteins to be associating with both alpha-synuclein and DJ-1. Further characterization of these docking proteins will likely shed more light on the mechanisms by which DJ-1 modulates the function of alpha-synuclein, and vice versa, in the setting of PD.

Bilimsel değerlendirme

Araştırma sorusu

Sorunun kapsamı orijinal çalışma üzerinden değerlendirilir.

Yöntem ve örneklem

Çalışma tasarımı ve örneklem için kaynak makaleyi kontrol edin.

Temel bulgular

Bu kayıt için editoryal olarak onaylanmış bulgu özeti henüz yayımlanmadı.

Sınırlılıklar

Sonuçların genellenebilirliği, yanlılık ve klinik anlamı ayrıca incelenmelidir.

Bibliyografik veriden yöntem, örneklem veya klinik sonuç çıkarımı yapılmaz.