NeuralCipher Araştırma özeti
Kaynak özetin Türkçe makine çevirisi. Klinik kullanım öncesinde özgün yayınla karşılaştırılmalı; hekim incelemesi değildir. cc by
Dopamin (DA) içeren nöronlarda sinyal transdüksiyonu çalışması ve Parkinson hastalığı için yeni terapötik yaklaşımların geliştirilmesi, bu tür nöronlardaki transgenlerin seçici ekspresyonunu gerektirir. Burada, birincil kültürde fare DA nöronlarını transfect etmek için nörotensin reseptör içselleştirmesinden yararlanan bir gen taşıyıcı sistemi olan NTS-polyplex'in kullanımının optimizasyonunu açıklıyoruz. Plazmidler DsRed2 (4.7 kbp) ve VGLUT2-Venus (11 kbp) bu taşıyıcı sistemin farklı boyutlardaki plazmidleri aktarma yeteneğini karşılaştırmak için kullanıldı. Nöronların yaşının etkisini (1, 3, 5 ve 8 gün tohumlamadan sonra), transfeksiyon sırasında kullanılan kültür medyasının (B27 ile koşullu orta ile neurobasal) ve plazmid DNA'sının taşıyıcıya üç molar oranını inceledik. NTS-polyplex, her iki plazmidi de bir kontrol N1E-115 hücre hattında başarılı bir şekilde transfect ederken, birincil kültürlenmiş DA nöronlarında sadece pDsRed2 plazmid transfect edilebilirdi. % 80 hücre canlılığı ile DA nöronlarında pDsRed2'nin% 20'lik transfeksiyon verimini elde ettik. Transfeksiyonun farmakolojik olarak nörotensin reseptörlerinin aktivasyonuna bağlı olduğu ve DA nöronları için seçici olduğu gösterilmiştir. Transfeksiyon için koşullu ortamın varlığı hücre canlılığını sağlamak için gerekli bulunmuştur. En olgun nöronlarda en yüksek transfeksiyon verimliliği elde edildi. Buna karşılık, VGLUT2-Venus plazmid ile transfeksiyon, büyük olasılıkla, test edilen üç molar oranında DA nöronlarının %15 hücre canlılığı ile kanıtlandığı gibi, gerekli yüksek molar oranlarından dolayı hücre hasarı üretti (1:36, 1:39 ve 1:42). 1:33'ten daha düşük molar oranlarda kullanıldığında, NTS-polyplex'in olgun kültürlü DA nöronlarını seçici olarak sadece düşük toksisite seviyelerine sahip olarak aktarabileceği sonucuna varıyoruz. Sonuçlarımız, NTS-polyplex'in Parkinson hastalığı için yeni terapötik yaklaşımların taranması için in vitro bir kullanım sistemi olan kültürlü DA nöronlarında hedeflenmiş gen iletimi için iyi bir potansiyele sahip olduğunu kanıtlamaktadır.
Özgün kaynak özetini okuyun
The study of signal transduction in dopamine (DA)-containing neurons as well as the development of new therapeutic approaches for Parkinson's disease requires the selective expression of transgenes in such neurons. Here we describe optimization of the use of the NTS-polyplex, a gene carrier system taking advantage of neurotensin receptor internalization, to transfect mouse DA neurons in primary culture. The plasmids DsRed2 (4.7 kbp) and VGLUT2-Venus (11 kbp) were used to compare the ability of this carrier system to transfect plasmids of different sizes. We examined the impact of age of the neurons (1, 3, 5 and 8 days after seeding), of culture media used during the transfection (Neurobasal with B27 vs. conditioned medium) and of three molar ratios of plasmid DNA to carrier. While the NTS-polyplex successfully transfected both plasmids in a control N1E-115 cell line, only the pDsRed2 plasmid could be transfected in primary cultured DA neurons. We achieved 20% transfection efficiency of pDsRed2 in DA neurons, with 80% cell viability. The transfection was demonstrated pharmacologically to be dependent on activation of neurotensin receptors and to be selective for DA neurons. The presence of conditioned medium for transfection was found to be required to insure cell viability. Highest transfection efficiency was achieved in the most mature neurons. In contrast, transfection with the VGLUT2-Venus plasmid produced cell damage, most likely due to the high molar ratios required, as evidenced by a 15% cell viability of DA neurons at the three molar ratios tested (1:36, 1:39 and 1:42). We conclude that, when used at molar ratios lower than 1:33, the NTS-polyplex can selectively transfect mature cultured DA neurons with only low levels of toxicity. Our results provide evidence that the NTS-polyplex has good potential for targeted gene delivery in cultured DA neurons, an in vitro system of great use for the screening of new therapeutic approaches for Parkinson's disease.
Bilimsel değerlendirme
Araştırma sorusu
Sorunun kapsamı orijinal çalışma üzerinden değerlendirilir.
Yöntem ve örneklem
Çalışma tasarımı ve örneklem için kaynak makaleyi kontrol edin.
Temel bulgular
Bu kayıt için editoryal olarak onaylanmış bulgu özeti henüz yayımlanmadı.
Sınırlılıklar
Sonuçların genellenebilirliği, yanlılık ve klinik anlamı ayrıca incelenmelidir.
Bibliyografik veriden yöntem, örneklem veya klinik sonuç çıkarımı yapılmaz.