NeuralCipher Araştırma özeti
Kaynak özetin Türkçe makine çevirisi. Klinik kullanım öncesinde özgün yayınla karşılaştırılmalı; hekim incelemesi değildir. cc by
LRRK2'deki (leucine-rich tekrar kinaz 2) eksik mutasyonlar PD'nin (Parkinson hastalığı) önemli bir nedenidir. LRRK2'ye karşı çeşitli antikorlar geliştirilmiştir, ancak bu poliklonal antikorları kullanan sonuçlar çeşitli sonuçlara yol açmıştır. Bu meydan okumayı ele almak için, Michael J. Parkinson Araştırmaları için Fox Vakfı, LRRK2 proteini boyunca epitopları hedefleyen bir dizi monoklonal antikor üretti. Mevcut makalede, fare, fare ve insan beyin dokusunda immunoblotlama, immünohistokimya, immünopresipitasyon ve kinaz aktivitesi tahlilleri için on monoklonal antikor için optimize edilmiş protokoller ve sonuçlar bildiriyoruz. Birkaç etkili antikor tanımlanmıştır, ancak sonuçlar fare monoklonal N241A/34'ün çoğu uygulama için uygun olduğunu ve en iyi genel tavşan monoklonal antikorunun c41-2 olduğunu göstermektedir. Bu antikorlar, immunoblotting yoluyla beklenen boyutta baskın bir bant üretti ve optimize edilmiş koşullar altında LRRK2-knockout hayvanlarından elde edilen dokuda etiketleme eksikliği yarattı. LRRK2 proteininin önemli bir kısmı çözünmeyen fraksiyonlara lokalize olur ve kemirgen veya insan dokularından herhangi bir fraksiyonda kesilmiş LRRK2 proteinine dair hiçbir kanıt tespit edilmemiştir. LRRK2 kinaz aktivitesinin doğrudan donmuş fare ve insan beyin dokusundan sağlam bir şekilde tespiti için bir tahlil geliştirilmiştir, ancak ölüm sonrası aralıkların ve işlem sürelerinin artmasına karşılık gelen aktivitedeki ani düşüşler gözlenmiştir. Son olarak, striatumda beyin lokalize LRRK2'nin en yüksek seviyelerini gösteriyoruz, ancak hem striatum hem de kortekste sıçan ve fare arasındaki fark ifade kalıplarını not ediyoruz. Önerilen standartlaştırılmış protokollerle birlikte kullanılabilirlikte sınırsız olan anti-LRRK2 monoklonal antikorlar, hem sağlık hem de hastalıkta LRRK2 fonksiyonunun tanımlanmasına yardımcı olmalıdır.
Özgün kaynak özetini okuyun
Missense mutations in LRRK2 (leucine-rich repeat kinase 2) are a major cause of PD (Parkinson's disease). Several antibodies against LRRK2 have been developed, but results using these polyclonal antibodies have varied widely leading to conflicting conclusions. To address this challenge, the Michael J. Fox Foundation for Parkinson's Research generated a number of monoclonal antibodies targeting epitopes across the LRRK2 protein. In the present paper, we report optimized protocols and results for ten monoclonal antibodies for immunoblotting, immunohistochemistry, immunoprecipitation and kinase activity assays, in rat, mouse and human brain tissue. Several efficacious antibodies were identified, but results demonstrate that the mouse monoclonal N241A/34 is suitable for most applications, with the best overall rabbit monoclonal antibody being c41-2. These antibodies produced a dominant band of the expected size via immunoblotting and a lack of labelling in tissue derived from LRRK2-knockout animals under optimized conditions. A significant proportion of LRRK2 protein localizes to insoluble fractions and no evidence of truncated LRRK2 protein was detected in any fraction from rodent or human tissues. An assay was developed for the robust detection of LRRK2 kinase activity directly from frozen mouse and human brain tissue, but precipitous declines in activity were observed that corresponded to increasing post-mortem intervals and processing times. Finally, we demonstrate the highest levels of brain-localized LRRK2 in the striatum, but note differential expression patterns between rat and mouse in both striatum and cortex. Anti-LRRK2 monoclonal antibodies that are unlimited in availability together with the proposed standardized protocols should aid in the definition of LRRK2 function in both health and disease.
Bilimsel değerlendirme
Araştırma sorusu
Sorunun kapsamı orijinal çalışma üzerinden değerlendirilir.
Yöntem ve örneklem
Çalışma tasarımı ve örneklem için kaynak makaleyi kontrol edin.
Temel bulgular
Bu kayıt için editoryal olarak onaylanmış bulgu özeti henüz yayımlanmadı.
Sınırlılıklar
Sonuçların genellenebilirliği, yanlılık ve klinik anlamı ayrıca incelenmelidir.
Bibliyografik veriden yöntem, örneklem veya klinik sonuç çıkarımı yapılmaz.