Expression analysis of Lrrk1, Lrrk2 and Lrrk2 splice variants in mice.

Araştırma özeti

Kaynak özetin Türkçe makine çevirisi. Klinik kullanım öncesinde özgün yayınla karşılaştırılmalı; hekim incelemesi değildir. cc by

Lösin bakımından zengin tekrar kinaz 2 genindeki (LRRK2) eksik mutasyonlar Parkinson hastalığının (PD) otozomal dominant formlarıyla bağlantılıdır. Lrrk2'nin fizyolojik rolü hakkında bilgi almak için, gelişen murin embriyosunda ve Mus musculus'un yetişkin beyninde Lrrk2 mRNA ve farklı ek varyantların dağılımını inceledik. Lrrk2-paralogu Lrrk1'in PD-gelişiminde gereksiz fonksiyonlara sahip olup olmadığını analiz etmek için, aynı dokulardaki Lrrk1 ve Lrrk2 ifadesini de karşılaştırdık. Situ hibridizasyonunda radyoaktif kullanarak, embriyonik evre E9.5'ten itibaren her iki genin de düşük seviyede her yerde ifadesini bulduk, bu da doğuma kadar kademeli olarak arttı. Gelişmekte olan merkezi sinir sistemi (CNS) bu zaman noktalarında belirgin bir Lrrk2 mRNA sinyali göstermedi. Bununla birlikte, tüm doğum sonrası beyinde Lrrk2, striatum ve yetişkin farelerin korteksinde en güçlü seviyeyi göstererek tespit edilebilir hale geldi; Lrrk1 sadece koku alma ampulünün mitral hücre katmanında tespit edilebilirdi. Bu nedenle, üst üste gelmeyen ifade kalıpları nedeniyle, PD patogenezinde Lrrk2 ve Lrrk1'in gereksiz bir işlevinin olası olmadığı görülmektedir. Lrrk2 mRNA ve protein seviyesinin birkaç beyin bölgesinde gerçek zamanlı PCR ve Western blot tarafından nicelenmesi, striatum ve korteksi doğum sonrası Lrrk2 ekspresyonunun sıcak noktaları olarak doğruladı. Lrrk2'nin güçlü ifadesi esas olarak nöronlarda, özellikle de striatal orta spiny nöronların dopamin reseptör 1 (DRD1a) ve 2 (DRD2)-pozitif alt popülasyonlarında bulunur. Son olarak, çeşitli yetişkin beyin bölgelerinden ve organlarından RNA örneklerinde Lrrk2'nin 2 yeni ekli-varyantı belirledik: atlanmış bir ekson 5'e sahip bir varyant ve alternatif bir ekson 42a'da sonlanan bir kesikli varyant. Bu iki ek varyantın kökenini belirlemek için, birincil sinir kültürlerini de bağımsız olarak analiz ettik ve bu varyantlar için mikroglia ve astrositlerde hücreye özgü ifade kalıpları bulduk.

Özgün kaynak özetini okuyun

Missense mutations in the leucine-rich repeat kinase 2 gene (LRRK2) are linked to autosomal dominant forms of Parkinson's disease (PD). In order to get insights into the physiological role of Lrrk2, we examined the distribution of Lrrk2 mRNA and different splice variants in the developing murine embryo and the adult brain of Mus musculus. To analyse if the Lrrk2-paralog, Lrrk1, may have redundant functions in PD-development, we also compared Lrrk1 and Lrrk2 expression in the same tissues. Using radioactive in situ hybridization, we found ubiquitous expression of both genes at low level from embryonic stage E9.5 onward, which progressively increased up until birth. The developing central nervous system (CNS) displayed no prominent Lrrk2 mRNA signals at these time-points. However, in the entire postnatal brain Lrrk2 became detectable, showing strongest level in the striatum and the cortex of adult mice; Lrrk1 was only detectable in the mitral cell layer of the olfactory bulb. Thus, due to the non-overlapping expression patterns, a redundant function of Lrrk2 and Lrrk1 in the pathogenesis of PD seems to be unlikely. Quantification of Lrrk2 mRNA and protein level in several brain regions by real-time PCR and Western blot verified the striatum and cortex as hotspots of postnatal Lrrk2 expression. Strong expression of Lrrk2 is mainly found in neurons, specifically in the dopamine receptor 1 (DRD1a) and 2 (DRD2)-positive subpopulations of the striatal medium spiny neurons. Finally, we identified 2 new splice-variants of Lrrk2 in RNA-samples from various adult brain regions and organs: a variant with a skipped exon 5 and a truncated variant terminating in an alternative exon 42a. In order to identify the origin of these two splice variants, we also analysed primary neural cultures independently and found cell-specific expression patterns for these variants in microglia and astrocytes.

Bilimsel değerlendirme

Araştırma sorusu

Sorunun kapsamı orijinal çalışma üzerinden değerlendirilir.

Yöntem ve örneklem

Çalışma tasarımı ve örneklem için kaynak makaleyi kontrol edin.

Temel bulgular

Bu kayıt için editoryal olarak onaylanmış bulgu özeti henüz yayımlanmadı.

Sınırlılıklar

Sonuçların genellenebilirliği, yanlılık ve klinik anlamı ayrıca incelenmelidir.

Bibliyografik veriden yöntem, örneklem veya klinik sonuç çıkarımı yapılmaz.