A novel Golgi retention signal RPWS for tumor suppressor UBIAD1.

Araştırma özeti

Kaynak özetin Türkçe makine çevirisi. Klinik kullanım öncesinde özgün yayınla karşılaştırılmalı; hekim incelemesi değildir. cc by

UBIAD1, fizyolojide K vitamini ve CoQ10 biyosentezinin yanı sıra dislipimedia kaynaklı SCD (Schnyder'ın kornea distrofisi), Parkinson hastalığı, kardiyovasküler hastalık ve mesane karsinomu da dahil olmak üzere patofizyolojide kritik rol oynar. UBIAD1'in hücre altı lokalizasyonu farklı hücre tiplerinde değiştiğinden, UBIAD1'in spesifik insan hastalığındaki tam hücre altı lokalizasyonunun karakterize edilmesi, moleküler mekanizmasını anlamak için hayati önem taşır. UBIAD1 mesane karsinomunu bastırırken, insan mesane karsinom hücre hattı T24'te hücre altı lokalizasyonunu inceledik. T24'te UBIAD1-EGFP'nin floresan görüntüleri, insan prostat kanseri hücre hattı PC-3, insan embriyonik böbrek hücre hattı HEK293 ve insan hepatocyte hücre hattı L02 benzer olduğundan, bu dört hücre hattı mevcut çalışma için kullanılmıştır. Floresan mikroskopi ve immünohistokimyanın bir kombinasyonunu kullanarak, UBIAD1'in Golgi ve endoplazmik retikulum (ER) üzerinde lokalize olduğu, ancak plazma zarında değil, T24 ve HEK293 hücrelerinde olduğu bulunmuştur. Taramalı elektron mikroskobu ve western blot analizi kullanarak, UBIAD1'in L02 hücrelerinden çıkarılan Golgi kesirinde zenginleştiğini ve UBAID1'in Golgi lokalizasyonunu doğruladığını tespit ettik. Site yönlendirmeli mutagenez, UBIAD1 N terminus üzerinde bir Arginin parmağı oluşturan RPWS motifinin Golgi tutma sinyali olarak hizmet ettiğini göstermiştir. Hem sikloheksimid hem de brefeldin A inhibisyon tahlilleri ile, UBIAD1'in endoplazmik retikulumdan (ER) bir COPII aracılı mekanizma ile Golgi'ye taşınabileceği gösterilmiştir. Akış sitometrisi analizine dayanarak, RPWS motifinin mutasyonunun T24 hücrelerinin UBIAD1 indüklenen apoptozunu azalttığı, UBIAD1'in uygun Golgi lokalizasyonunun tümör baskılayıcı aktivitesini etkilediğini gösterdiği gösterilmiştir. Bu çalışma, insan hastalıklarında UBIAD1'in moleküler mekanizmasını daha iyi anlamanın yolunu açıyor.

Özgün kaynak özetini okuyun

UBIAD1 plays critical roles in physiology including vitamin K and CoQ10 biosynthesis as well as pathophysiology including dyslipimedia-induced SCD (Schnyder's corneal dystrophy), Parkinson's disease, cardiovascular disease and bladder carcinoma. Since the subcellular localization of UBIAD1 varies in different cell types, characterization of the exact subcellular localization of UBIAD1 in specific human disease is vital for understanding its molecular mechanism. As UBIAD1 suppresses bladder carcinoma, we studied its subcellular localization in human bladder carcinoma cell line T24. Since fluorescent images of UBIAD1-EGFP in T24, human prostate cancer cell line PC-3, human embryonic kidney cell line HEK293 and human hepatocyte cell line L02 are similar, these four cell lines were used for present study. Using a combination of fluorescent microscopy and immunohistochemistry, it was found that UBIAD1 localized on the Golgi and endoplasmic reticulum (ER), but not on the plasma membrane, of T24 and HEK293 cells. Using scanning electron microscopy and western blot analysis, we found that UBIAD1 is enriched in the Golgi fraction extracted from the L02 cells, verifying the Golgi localization of UBAID1. Site-directed mutagenesis showed that the RPWS motif, which forms an Arginine finger on the UBIAD1 N terminus, serves as the Golgi retention signal. With both cycloheximide and brefeldin A inhibition assays, it was shown that UBIAD1 may be transported from the endoplasmic reticulum (ER) to the Golgi by a COPII-mediated mechanism. Based upon flow cytometry analysis, it is shown that mutation of the RPWS motif reduced the UBIAD1-induced apoptosis of T24 cells, indicating that the proper Golgi localization of UBIAD1 influences its tumor suppressant activity. This study paves the way for further understanding the molecular mechanism of UBIAD1 in human diseases.

Bilimsel değerlendirme

Araştırma sorusu

Sorunun kapsamı orijinal çalışma üzerinden değerlendirilir.

Yöntem ve örneklem

Çalışma tasarımı ve örneklem için kaynak makaleyi kontrol edin.

Temel bulgular

Bu kayıt için editoryal olarak onaylanmış bulgu özeti henüz yayımlanmadı.

Sınırlılıklar

Sonuçların genellenebilirliği, yanlılık ve klinik anlamı ayrıca incelenmelidir.

Bibliyografik veriden yöntem, örneklem veya klinik sonuç çıkarımı yapılmaz.