NeuralCipher Araştırma özeti
Kaynak özetin Türkçe makine çevirisi. Klinik kullanım öncesinde özgün yayınla karşılaştırılmalı; hekim incelemesi değildir. cc by
BackgroundParkin (PARK2), Familyal Parkinson Hastalığı'nda (PD) yaygın olarak mutasyona uğrayan bir E3 ubiquitin ligazdır. Hücre kültürü modellerinde Parkin, PINK1 tarafından akut polarize mitokondriye alınır. PINK1, birden fazla proteinin ubiquitinasyonuna yol açan parkin aktivitesini aktive eder, bu da mitokondrinin mitofaji ile temizlenmesini teşvik eder. Birçok substrat, hücre kültürü modellerini, depolarize edici ilaçlar veya proteazom inhibitörleri ile birlikte kullanarak tanımlanmıştır, ancak daha fizyolojik ortamlarda değil.MetodlarBurada, sineklerde ubiquitinated proteinleri izole etmek için yakın zamanda tanıtılan BioUb stratejisini kullandık. Parkin Wild-Type (WT) ve Parkin Ligase ölü (LD) ifadesinin ardından, kütle spektrometrisi ve sıkı biyoinformatik analizi ile analiz ettik, bu proteinler in vivo modeli kullanarak sabit durum Parkin substratlarının ilk anketini sağlamak için diferansiyel olarak ubikuitine edildi. SH-SY5Y hücrelerindeki bu substratlardan birini doğrulamak için in vivo ubiquitination tahlili kullandık.SonuçlarParkin aşırı ekspresyonunu takiben daha belirgin olarak ubiquitinasyon gösteren 35 protein tespit ettik. Bunlar arasında birkaç mitokondriyal protein ve v-ATPaz alt birimleri, Syx5/STX5, ALiX/PDCD6IP ve Vps4 gibi bir dizi endozomal kaçakçılık düzenleyicisi bulunmaktadır. Ayrıca retromer bileşeni Vps35'i, yakın zamanda parkin ile genetik olarak etkileşime girdiği gösterilen başka bir PD ile ilişkili geni de tanımladık. Önemli olarak, biz insan nöroblastom hücrelerinde VPS35'in Parkin bağımlı ubikuitinasyonunu doğruladık.Sonuçlarımız Kolektif olarak, Parkin aktivitesinin akut mitokondriyal depolarizasyon tarafından açıkça önyargılı olmayan olası fizyolojik işlevlerine yeni yol açar.
Özgün kaynak özetini okuyun
BackgroundParkin (PARK2) is an E3 ubiquitin ligase that is commonly mutated in Familial Parkinson's Disease (PD). In cell culture models, Parkin is recruited to acutely depolarised mitochondria by PINK1. PINK1 activates Parkin activity leading to ubiquitination of multiple proteins, which in turn promotes clearance of mitochondria by mitophagy. Many substrates have been identified using cell culture models in combination with depolarising drugs or proteasome inhibitors, but not in more physiological settings.MethodsHere we utilized the recently introduced BioUb strategy to isolate ubiquitinated proteins in flies. Following Parkin Wild-Type (WT) and Parkin Ligase dead (LD) expression we analysed by mass spectrometry and stringent bioinformatics analysis those proteins differentially ubiquitinated to provide the first survey of steady state Parkin substrates using an in vivo model. We further used an in vivo ubiquitination assay to validate one of those substrates in SH-SY5Y cells.ResultsWe identified 35 proteins that are more prominently ubiquitinated following Parkin over-expression. These include several mitochondrial proteins and a number of endosomal trafficking regulators such as v-ATPase sub-units, Syx5/STX5, ALiX/PDCD6IP and Vps4. We also identified the retromer component, Vps35, another PD-associated gene that has recently been shown to interact genetically with parkin. Importantly, we validated Parkin-dependent ubiquitination of VPS35 in human neuroblastoma cells.ConclusionsCollectively our results provide new leads to the possible physiological functions of Parkin activity that are not overtly biased by acute mitochondrial depolarisation.
Bilimsel değerlendirme
Araştırma sorusu
Sorunun kapsamı orijinal çalışma üzerinden değerlendirilir.
Yöntem ve örneklem
Çalışma tasarımı ve örneklem için kaynak makaleyi kontrol edin.
Temel bulgular
Bu kayıt için editoryal olarak onaylanmış bulgu özeti henüz yayımlanmadı.
Sınırlılıklar
Sonuçların genellenebilirliği, yanlılık ve klinik anlamı ayrıca incelenmelidir.
Bibliyografik veriden yöntem, örneklem veya klinik sonuç çıkarımı yapılmaz.