CRISPR/Cas9 Editing for Gaucher Disease Modelling.

Araştırma özeti

Kaynak özetin Türkçe makine çevirisi. Klinik kullanım öncesinde özgün yayınla karşılaştırılmalı; hekim incelemesi değildir. cc by

Gaucher hastalığı (GD), asit beta-glukozidaz genindeki (GBA1) mutasyonların neden olduğu otozomal resesif lizozomal depolama bozukluğudur. GD'ye neden olmasının yanı sıra, GBA1 mutasyonları Parkinson hastalığını geliştirmede ana genetik risk faktörüdür. GD'deki nörolojik belirtilerin moleküler temeli zor olmaya devam ediyor. Bununla birlikte, nöroinflamasyon bu süreçte önemli bir oyuncu olarak önerilmiştir. İnsan monositik THP-1 hücre hattında GBA1'i düzenlemek için CRISPR/Cas9 teknolojisini kullandık, monositlerin izojenik GD modelini geliştirmek için ve glioblastoma U87 hücre hatlarında glial hücrelerin izojenik GD modelini üretmek için. Her ikisi de düzenlenmiş (GBA1 mutant) hücre hatları, düşük seviyelerde mutant asit beta-glukozidaz ekspresyonu, artık aktivitenin% 1'inden daha az ve büyük substrat birikimi sundu. Dahası, U87 GBA1 mutant hücreleri, mutant enzimin ER'de tutulduğunu ve proteazom bozulmasına maruz kaldığını, ortaya çıkan protein tepkisini (UPR) tetiklediğini gösterdi. U87 GBA1 mutant hücreleri, inflamasyon aktivasyonu, alfa-sin birikimi ve vahşi tip hücrelere kıyasla daha yüksek hücre ölüm oranı ile birlikte interlökin-1beta üretimini arttırdı. Sonuç olarak, GD patofizyoloji çalışmalarında ve yüksek verimli ilaç taramalarında kullanılmak üzere ticari olarak erişilebilir hücrelerden elde edilen GD'nin güvenilir, izojenik ve kullanımı kolay hücresel modellerini geliştirdik.

Özgün kaynak özetini okuyun

Gaucher disease (GD) is an autosomal recessive lysosomal storage disorder caused by mutations in the acid β-glucosidase gene (GBA1). Besides causing GD, GBA1 mutations constitute the main genetic risk factor for developing Parkinson's disease. The molecular basis of neurological manifestations in GD remain elusive. However, neuroinflammation has been proposed as a key player in this process. We exploited CRISPR/Cas9 technology to edit GBA1 in the human monocytic THP-1 cell line to develop an isogenic GD model of monocytes and in glioblastoma U87 cell lines to generate an isogenic GD model of glial cells. Both edited (GBA1 mutant) cell lines presented low levels of mutant acid β-glucosidase expression, less than 1% of residual activity and massive accumulation of substrate. Moreover, U87 GBA1 mutant cells showed that the mutant enzyme was retained in the ER and subjected to proteasomal degradation, triggering unfolded protein response (UPR). U87 GBA1 mutant cells displayed an increased production of interleukin-1β, both with and without inflammosome activation, α-syn accumulation and a higher rate of cell death in comparison with wild-type cells. In conclusion, we developed reliable, isogenic, and easy-to-handle cellular models of GD obtained from commercially accessible cells to be employed in GD pathophysiology studies and high-throughput drug screenings.

Bilimsel değerlendirme

Araştırma sorusu

Sorunun kapsamı orijinal çalışma üzerinden değerlendirilir.

Yöntem ve örneklem

Çalışma tasarımı ve örneklem için kaynak makaleyi kontrol edin.

Temel bulgular

Bu kayıt için editoryal olarak onaylanmış bulgu özeti henüz yayımlanmadı.

Sınırlılıklar

Sonuçların genellenebilirliği, yanlılık ve klinik anlamı ayrıca incelenmelidir.

Bibliyografik veriden yöntem, örneklem veya klinik sonuç çıkarımı yapılmaz.