Quantitative Measurements of LRRK2 in Human Cerebrospinal Fluid Demonstrates Increased Levels in G2019S Patients.

Araştırma özeti

Kaynak özetin Türkçe makine çevirisi. Klinik kullanım öncesinde özgün yayınla karşılaştırılmalı; hekim incelemesi değildir. cc by

Leucine-zengin tekrar kinaz 2 (LRRK2) mutasyonları, geç başlangıçlı Parkinson hastalığı (PD) gelişimi için en önemli genetik risk faktörleri arasındadır. Bir terapötikin LRRK2 seviyelerini potansiyel bir hastalık değiştirme stratejisi olarak modüle edip edemeyeceğini anlamak için, proteini yüksek hassasiyet ve özgüllükle ölçmek için yöntemlere sahip olmak önemlidir. Bugüne kadar, beyin omurilik sıvısındaki (CSF) LRRK2 ölçümleri, diferansiyel ultrasantrifügasyon ve batı lekesi tespiti yoluyla hücre dışı vezikül zenginleştirmeyi kullanmıştır. Amacımız klinik bir çalışmada konuşlandırılabilecek bir metodoloji geliştirmekti, bu nedenle verim, sağlamlık ve hassasiyet kritikti. Bu amaçla, 1 ml insan CSF'sinden LRRK2'yi tespit edebilen bir Anti-peptid Antibody (SISCAPA) tahlili ile Kararlı İzotop Standart Yakalama geliştirdik. Tahlil, ticari olarak temin edilebilen LRRK2 monoklonal antikor (N241A/34) kullanır ve hücre dışı vezikül zenginleştirme adımları gerektirmez. Tahlil, LRRK2 proteininin mutlak kantitasyonuna izin veren kararlı izotop peptid ilavesini içerir. Testin CSF ölçümleri için yeterli şekilde yapıldığını ve travmatik bel ponksiyonundan kaynaklanan kan kirlenmesinin ciddi bir analitik zorluk oluşturmadığını belirledik. Daha sonra bu tekniği MJFF LRRK2 Kohort Konsorsiyumu'ndan sağlıklı kontroller, sporadik PD hastaları ve PD ile ve PD olmadan LRRK2 mutasyon taşıyıcıları içeren 106 CSF örneğine uyguladık. Tespit edilebilir LRRK2 sinyaline sahip 105 örnekten, G2019S LRRK2 mutasyonuna sahip PD grubunun diğer tüm gruplara kıyasla önemli ölçüde daha yüksek CSF LRRK2 seviyelerine sahip olduğunu bulduk. Ayrıca CSF LRRK2'nin katılımcının yaşıyla birlikte arttığını bulduk. Birlikte ele alındığında, bu çalışma, mevcut ve gelecekteki LRRK2 terapötik klinik denemeleri için etkileri olan CSF gibi zorlu bir matriste LRRK2'yi ölçme yeteneğimizde bir adımı temsil ediyor.

Özgün kaynak özetini okuyun

Leucine-rich repeat kinase 2 (LRRK2) mutations are among the most significant genetic risk factors for developing late onset Parkinson's disease (PD). To understand whether a therapeutic can modulate LRRK2 levels as a potential disease modifying strategy, it is important to have methods in place to measure the protein with high sensitivity and specificity. To date, LRRK2 measurements in cerebrospinal fluid (CSF) have used extracellular vesicle enrichment via differential ultracentrifugation and western blot detection. Our goal was to develop a methodology which could be deployed in a clinical trial, therefore throughput, robustness and sensitivity were critical. To this end, we developed a Stable Isotope Standard Capture by Anti-peptide Antibody (SISCAPA) assay which is capable of detecting LRRK2 from 1 ml of human CSF. The assay uses a commercially available LRRK2 monoclonal antibody (N241A/34) and does not require extracellular vesicle enrichment steps. The assay includes stable isotope peptide addition which allows for absolute quantitation of LRRK2 protein. We determined that the assay performed adequately for CSF measurements and that blood contamination from traumatic lumbar puncture does not pose a serious analytical challenge. We then applied this technique to 106 CSF samples from the MJFF LRRK2 Cohort Consortium which includes healthy controls, sporadic PD patients and LRRK2 mutation carriers with and without PD. Of the 105 samples that had detectable LRRK2 signal, we found that the PD group with the G2019S LRRK2 mutation had significantly higher CSF LRRK2 levels compared to all other groups. We also found that CSF LRRK2 increased with the age of the participant. Taken together, this work represents a step forward in our ability to measure LRRK2 in a challenging matrix like CSF which has implications for current and future LRRK2 therapeutic clinical trials.

Bilimsel değerlendirme

Araştırma sorusu

Sorunun kapsamı orijinal çalışma üzerinden değerlendirilir.

Yöntem ve örneklem

Çalışma tasarımı ve örneklem için kaynak makaleyi kontrol edin.

Temel bulgular

Bu kayıt için editoryal olarak onaylanmış bulgu özeti henüz yayımlanmadı.

Sınırlılıklar

Sonuçların genellenebilirliği, yanlılık ve klinik anlamı ayrıca incelenmelidir.

Bibliyografik veriden yöntem, örneklem veya klinik sonuç çıkarımı yapılmaz.