NeuralCipher Araştırma özeti
Kaynak özetin Türkçe makine çevirisi. Klinik kullanım öncesinde özgün yayınla karşılaştırılmalı; hekim incelemesi değildir. cc by
Leucine açısından zengin tekrar kinaz 2 (LRRK2)'deki patojenik mutasyonlar Parkinson hastalığının (PD) baskın genetik nedenidir. Etkinliğini arttırırlar, artırılmış Rab10-Thr73 fosforilasyona neden olurlar ve tersine, LRRK2 inhibisyonu pRab10 seviyelerini azaltır. Şu anda, ilaç hedef nişanı veya hasta tabakalaşması için pRab10 seviyelerini ölçmek için bir tahlil yoktur. Bu zorluğu karşılamak için, insan örneklerinde Rab10-Thr73 fosforilasyon stokiyometrisini belirlemek için yüksek doğruluk ve hassasiyet hedefli kütle spektrometrisi (MS) tabanlı bir tahlil geliştirdik. Rab10-Thr73'ü çevreleyen fosforile edilmiş ve nonfosforile triptik peptidler için sentetik kararlı izotop etiketli (SIL) analogları kullanır ve doğrudan endojen fosfopeptidin attomol miktarlarından Rab10 fosforilasyon yüzdesini türetir. SIL ve endojen fosfopeptidler, uygun enjeksiyon süreleriyle ayrı ayrı bir Orbitrap analizöre kabul edilir. LRRK2 mutasyon taşıyıcılarının nötrofillerinde LRRK2 inhibisyonundan önce ve sonra Rab10-Thr73 fosforilasyon stoichiometrisini belirleyerek tahlillerimizin tekrarlanabilirliğini test ediyoruz. Sağlıklı kontrollerle karşılaştırıldığında, PD predispozan mutasyon taşıyıcıları LRRK2 G2019S ve VPS35 D620N sırasıyla 1.9 kat ve 3.7 kat artmış pRab10 seviyelerini gösterir. Genel MS tabanlı tahlilimiz, pRab10'un prognostik PD işaretleyicisi olarak ilişkisini daha da belirler ve LRRK2 inhibitör etkinliğini belirlemek ve PD hastalarını LRRK2 inhibitör tedavisi için katmanlaştırmak için güçlü bir araçtır.
Özgün kaynak özetini okuyun
Pathogenic mutations in the Leucine-rich repeat kinase 2 (LRRK2) are the predominant genetic cause of Parkinson's disease (PD). They increase its activity, resulting in augmented Rab10-Thr73 phosphorylation and conversely, LRRK2 inhibition decreases pRab10 levels. Currently, there is no assay to quantify pRab10 levels for drug target engagement or patient stratification. To meet this challenge, we developed an high accuracy and sensitivity targeted mass spectrometry (MS)-based assay for determining Rab10-Thr73 phosphorylation stoichiometry in human samples. It uses synthetic stable isotope-labeled (SIL) analogues for both phosphorylated and nonphosphorylated tryptic peptides surrounding Rab10-Thr73 to directly derive the percentage of Rab10 phosphorylation from attomole amounts of the endogenous phosphopeptide. The SIL and the endogenous phosphopeptides are separately admitted into an Orbitrap analyzer with the appropriate injection times. We test the reproducibility of our assay by determining Rab10-Thr73 phosphorylation stoichiometry in neutrophils of LRRK2 mutation carriers before and after LRRK2 inhibition. Compared with healthy controls, the PD predisposing mutation carriers LRRK2 G2019S and VPS35 D620N display 1.9-fold and 3.7-fold increased pRab10 levels, respectively. Our generic MS-based assay further establishes the relevance of pRab10 as a prognostic PD marker and is a powerful tool for determining LRRK2 inhibitor efficacy and for stratifying PD patients for LRRK2 inhibitor treatment.
Bilimsel değerlendirme
Araştırma sorusu
Sorunun kapsamı orijinal çalışma üzerinden değerlendirilir.
Yöntem ve örneklem
Çalışma tasarımı ve örneklem için kaynak makaleyi kontrol edin.
Temel bulgular
Bu kayıt için editoryal olarak onaylanmış bulgu özeti henüz yayımlanmadı.
Sınırlılıklar
Sonuçların genellenebilirliği, yanlılık ve klinik anlamı ayrıca incelenmelidir.
Bibliyografik veriden yöntem, örneklem veya klinik sonuç çıkarımı yapılmaz.