NeuralCipher Araştırma özeti
Kaynak özetin Türkçe makine çevirisi. Klinik kullanım öncesinde özgün yayınla karşılaştırılmalı; hekim incelemesi değildir. cc by
Serin / treonin fosfatazlar, çeşitli patolojilerin gelişiminde yer alan protein kinazlarının aktivitelerini modüle etmekten sorumludur. Burada bir PEP tarama yaklaşımı ile LRRK2'nin bir peptidini, Parkinson hastalığı ile ilişkili bir proteini, fosfataz PP1 ile etkileşime girerek tanımladık. Biyolojik aktivitesini incelemek için, peptid N-terminal aracılığıyla optimize edilmiş bir hücre nüfuzlu peptid ile kaynaştı. Orijinal peptid beş müdahale peptidinden sentezlendik ve anti-LRRK2 immünoprepitatlarda rekabet yoluyla LRRK2/PP1 etkileşimini bozabilen iki (Mut3DPT-LRRK2-Kısa ve Mut3DPT-LRRK2-Uzun) tespit ettik. FITC etiketli peptidleri kullanarak, sağlıklı veya hasta insan bağışçılarından elde edilen birincil hücrelerin yanı sıra hücre hatlarına içselleştirmelerini doğruladık. ELISA testi ile saflaştırılmış PP1 proteinine Mut3DPT-LRRK2-Uzun peptidin birleşmesini doğruladık. Mut3DPT-LRRK2-5 ila 8 N veya C-terminal delesyonları olan peptidler, LRRK2/PP1 ilişkisini bozamadılar ve saflaştırılmış PP1 proteini ile ilişkilendirilemediler. PP1 / LRRK2 etkileşimini engelleyen müdahale dizileri de kan beyin bariyerini geçebilen bir mekik peptidine kaynaşmış ve yeni oluşturulan peptidlerin BBB-LRRK2-Short ve BBB-LRRK2-Long'un proteaz bozulmasına karşı son derece dirençli olduğunu göstermiştir. Ayrıca, PP1/LRRK2 etkileşimini engellediler ve hücrelere nüfuz ettiler. Bu nedenle, bu yeni oluşturulan peptidler, normal ve patolojik koşullarda LRRK2/PP1 etkileşiminin rolünün araştırılmasında yeni araçlar olarak kullanılabilir.
Özgün kaynak özetini okuyun
Serine/threonine phosphatases are responsible for modulating the activities of the protein kinases implicated in the development of several pathologies. Here we identified by a PEP-scan approach a peptide of LRRK2, a Parkinson's disease associated protein, interacting with the phosphatase PP1. In order to study its biological activity, the peptide was fused via its N-terminal to an optimized cell penetrating peptide. We synthesized from the original peptide five interfering peptides and identified two (Mut3DPT-LRRK2-Short and Mut3DPT-LRRK2-Long) able to disrupt the LRRK2/PP1 interaction by competition in anti-LRRK2 immunoprecipitates. Using FITC-labelled peptides, we confirmed their internalization into cell lines as well as into primary cells obtained from healthy or ill human donors. We confirmed by ELISA test the association of Mut3DPT-LRRK2-Long peptide to purified PP1 protein. The peptides Mut3DPT-LRRK2-5 to 8 with either N or C-terminal deletions were not able to disrupt the association LRRK2/PP1 nor to associate with purified PP1 protein. The interfering sequences blocking the PP1/LRRK2 interaction were also fused to a shuttle peptide able to cross the blood brain barrier and showed that the newly generated peptides BBB-LRRK2-Short and BBB-LRRK2-Long were highly resistant to protease degradation. Furthermore, they blocked PP1/LRRK2 interaction and they penetrated into cells. Hence, these newly generated peptides can be employed as new tools in the investigation of the role of the LRRK2/PP1 interaction in normal and pathological conditions.
Bilimsel değerlendirme
Araştırma sorusu
Sorunun kapsamı orijinal çalışma üzerinden değerlendirilir.
Yöntem ve örneklem
Çalışma tasarımı ve örneklem için kaynak makaleyi kontrol edin.
Temel bulgular
Bu kayıt için editoryal olarak onaylanmış bulgu özeti henüz yayımlanmadı.
Sınırlılıklar
Sonuçların genellenebilirliği, yanlılık ve klinik anlamı ayrıca incelenmelidir.
Bibliyografik veriden yöntem, örneklem veya klinik sonuç çıkarımı yapılmaz.