NeuralCipher Araştırma özeti
Kaynak özetin Türkçe makine çevirisi. Klinik kullanım öncesinde özgün yayınla karşılaştırılmalı; hekim incelemesi değildir. cc by
LRRK2'nin protein kinaz aktivitesini artıran mutasyonlar, ailesel Parkinson hastalığının en yaygın nedenlerinden biridir. LRRK2, Rab GTPases'in bir alt kümesini Switch-II motifi içinde fosforile eder ve efektörlerle etkileşimi etkiler. LRRK2-fosforilatlı Rab substratlarının (Rab1, Rab3, Rab8, Rab10, Rab35 ve Rab43) endojen seviyelerinin yanı sıra Ser910 ve Ser935 biyobelirteç sitelerinde toplam Rab, LRRK2 ve LR2-fosforilat seviyelerini ölçmek için yeni, çok eksenli hedefli bir kütle spektrometrisi tahlilini tanımlar ve onaylarız. Bu tahlili kullanarak, pRab proteinlerinin her birinin farklı hücrelerdeki (fare embriyonik fibroblastlar, insan nötrofilleri) ve fare dokularındaki (beyin, böbrek, akciğer ve dalak) göreceli seviyelerini ilk kez nicelleştiriyoruz. Bu bileşenlerin Parkinson'un patojenik mutasyonlarından (LRRK2[R1441C] ve VPS35[D620N]) ve LRRK2 inhibitörlerinden nasıl etkilendiğini tanımlıyoruz. VPS35[D620N] olduğunu, ancak LRRK2[R1441C] mutasyonunun değil, endojen Rab1'in LRRK2 için fizyolojik bir substrat olduğuna dair ilk kanıtları sağlayarak, bir LRRK2 inhibitörünün uygulanmasıyla engellenen bir şekilde Rab1 fosforilasyonunu artırdığını görüyoruz. Parkinson hastalarında VPS35[D620N] mutasyonları ile çoklu Rab proteinlerinin fosforilasyonunun (Rab1, Rab3, Rab8, Rab10 ve Rab43) yükseldiğini göstermek için bu tahlilden yararlanıyoruz. Bu tahlilin şu anda LRRK2 Rab sinyalizasyon yolunu değerlendirmek için kullanılan immünoblotlama yaklaşımları üzerindeki faydalarını vurguluyoruz.
Özgün kaynak özetini okuyun
Mutations that increase the protein kinase activity of LRRK2 are one of the most common causes of familial Parkinson's disease. LRRK2 phosphorylates a subset of Rab GTPases within their Switch-II motif, impacting interaction with effectors. We describe and validate a new, multiplexed targeted mass spectrometry assay to quantify endogenous levels of LRRK2-phosphorylated Rab substrates (Rab1, Rab3, Rab8, Rab10, Rab35 and Rab43) as well as total levels of Rabs, LRRK2 and LRRK2-phosphorylated at the Ser910 and Ser935 biomarker sites. Exploiting this assay, we quantify for the first time the relative levels of each of the pRab proteins in different cells (mouse embryonic fibroblasts, human neutrophils) and mouse tissues (brain, kidney, lung and spleen). We define how these components are impacted by Parkinson's pathogenic mutations (LRRK2[R1441C] and VPS35[D620N]) and LRRK2 inhibitors. We find that the VPS35[D620N], but not LRRK2[R1441C] mutation, enhances Rab1 phosphorylation in a manner blocked by administration of an LRRK2 inhibitor, providing the first evidence that endogenous Rab1 is a physiological substrate for LRRK2. We exploit this assay to demonstrate that in Parkinson's patients with VPS35[D620N] mutations, phosphorylation of multiple Rab proteins (Rab1, Rab3, Rab8, Rab10 and Rab43) is elevated. We highlight the benefits of this assay over immunoblotting approaches currently deployed to assess LRRK2 Rab signalling pathway.
Bilimsel değerlendirme
Araştırma sorusu
Sorunun kapsamı orijinal çalışma üzerinden değerlendirilir.
Yöntem ve örneklem
Çalışma tasarımı ve örneklem için kaynak makaleyi kontrol edin.
Temel bulgular
Bu kayıt için editoryal olarak onaylanmış bulgu özeti henüz yayımlanmadı.
Sınırlılıklar
Sonuçların genellenebilirliği, yanlılık ve klinik anlamı ayrıca incelenmelidir.
Bibliyografik veriden yöntem, örneklem veya klinik sonuç çıkarımı yapılmaz.