The PINK1-Parkin mitophagy signalling pathway is not functional in peripheral blood mononuclear cells.

Araştırma özeti

Kaynak özetin Türkçe makine çevirisi. Klinik kullanım öncesinde özgün yayınla karşılaştırılmalı; hekim incelemesi değildir. cc by

PINK1 ve PRKN genlerindeki mutasyonlar erken başlangıçlı ailesel Parkinson hastalığının en yaygın nedenidir. Bu genler sırasıyla PINK1 ve Parkin proteinlerini kodlarlar, bunlar mitofaji yoluyla işlevsiz mitokondrinin bozulmasında rol oynarlar. PINK1 -Parkin aracılı mitofajide erken bir adım, mitofusin proteinleri MFN1 ve -2'nin ubiquitinasyonudur. Hasta örneklerinde MFN1 ve -2'nin ubiquitinasyonu bu nedenle PINK1 ve PRKN mutasyonlarının fonksiyonel etkilerini belirlemek ve idiopatik hastaları potansiyel mitofaji kusurları için taramak için bir biyobelirteç görevi görebilir. Periferik kan mononükleer hücrelerinde (PBMC'lerde) PINK1 -Parkin mitofaji makinelerinin ekspresyonunu karakterize etmeyi ve bu hücrelerin mitofajiyi MFN1 ve -2 ubiquitinasyon analizi yoluyla değerlendirmek için bir platform olarak hizmet edip edemeyeceğini değerlendirmeyi amaçladık. Mitofaji, protonofore CCCP ile tedavi yoluyla mitokondriyal depolarizasyon yoluyla indüklendi ve ubiquitinated MFN proteinleri batı lekelenmesi ile analiz edildi. Buna ek olarak, PINK1 ve PRKN mRNA ve protein ekspresyon seviyeleri sırasıyla ters transkriptaz nicel PCR ve batı lekeleme ile karakterize edilmiştir. CCCP tedavisi primer fibroblastlarda MFN ubiquitinasyona, SH-SY5Y nöroblastom hücrelerine ve Jurkat lökaemik hücrelere yol açarken, PBMC'lerin tedavisi MFN'nin ubiquitinasyonuna neden olmadı. PRKN mRNA ve protein, PBMC'lerde Jurkat ve fibroblast hücrelerinde gözlemlenenlerle karşılaştırılabilir seviyelerde kolayca tespit edilebilirdi. Buna karşılık, PINK1 proteini tespit edilemedi ve PINK1 mRNA seviyeleri kontrol PBMC'lerinde oldukça düşüktü. Bulgularımız PINK1 -Parkin mitofaji sinyalizasyon yolunun PBMC'lerde işlevsel olmadığını göstermektedir. Bu nedenle, PBMC'ler Parkinson hastalığı hastalarında mitofaji fonksiyonunun analizi için uygun bir biyo örnek değildir.

Özgün kaynak özetini okuyun

Mutations in the PINK1 and PRKN genes are the most common cause of early-onset familial Parkinson disease. These genes code for the PINK1 and Parkin proteins, respectively, which are involved in the degradation of dysfunctional mitochondria through mitophagy. An early step in PINK1 -Parkin mediated mitophagy is the ubiquitination of the mitofusin proteins MFN1 and -2. The ubiquitination of MFN1 and -2 in patient samples may therefore serve as a biomarker to determine the functional effects of PINK1 and PRKN mutations, and to screen idiopathic patients for potential mitophagy defects. We aimed to characterise the expression of the PINK1 -Parkin mitophagy machinery in peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) and assess if these cells could serve as a platform to evaluate mitophagy via analysis of MFN1 and -2 ubiquitination. Mitophagy was induced through mitochondrial depolarisation by treatment with the protonophore CCCP and ubiquitinated MFN proteins were analysed by western blotting. In addition, PINK1 and PRKN mRNA and protein expression levels were characterised with reverse transcriptase quantitative PCR and western blotting, respectively. Whilst CCCP treatment led to MFN ubiquitination in primary fibroblasts, SH-SY5Y neuroblastoma cells and Jurkat leukaemic cells, treatment of PBMCs did not induce ubiquitination of MFN. PRKN mRNA and protein was readily detectable in PBMCs at comparable levels to those observed in Jurkat and fibroblast cells. In contrast, PINK1 protein was undetectable and PINK1 mRNA levels were remarkably low in control PBMCs. Our findings suggest that the PINK1 -Parkin mitophagy signalling pathway is not functional in PBMCs. Therefore, PBMCs are not a suitable biosample for analysis of mitophagy function in Parkinson disease patients.

Bilimsel değerlendirme

Araştırma sorusu

Sorunun kapsamı orijinal çalışma üzerinden değerlendirilir.

Yöntem ve örneklem

Çalışma tasarımı ve örneklem için kaynak makaleyi kontrol edin.

Temel bulgular

Bu kayıt için editoryal olarak onaylanmış bulgu özeti henüz yayımlanmadı.

Sınırlılıklar

Sonuçların genellenebilirliği, yanlılık ve klinik anlamı ayrıca incelenmelidir.

Bibliyografik veriden yöntem, örneklem veya klinik sonuç çıkarımı yapılmaz.