NeuralCipher Araştırma özeti
Kaynak özetin Türkçe makine çevirisi. Klinik kullanım öncesinde özgün yayınla karşılaştırılmalı; hekim incelemesi değildir. cc by
Bu makalede, proteinlerin on-line aptamer afinite katı faz ekstraksiyonu ve immobilize enzim mikroreaktör kılcal elektroforez-kütle spektrometrisi (AA-SPE-IMER-CE-MS) yoluyla hassas hedefli alt-up analizi için tam entegre bir valfsiz yöntem sunuyoruz. Yöntem, Parkinson hastalığı da dahil olmak üzere farklı nörodejeneratif bozukluklarla ilgili bir protein biyobelirteç olan alfa-sinüklein (alfa-syn) analiz edilerek geliştirilmiştir. Optimize edilmiş koşullar altında, alfa-sin, enzimatik sindirim, elektroforetik ayırma ve triptik peptidlerin kütle spektrometrisi ile tanımlanmasının on-line saflaştırılması ve prekonsantrasyonu 35 dakikadan daha az bir sürede elde edildi. Tespit sınırı, sindirilmiş proteinin 0.02 kupa mL-1'i idi (kapanımın %66,7'si, yani beklenen 12 triptik peptidden 8'i tespit edildi). Bu değer, IMER-CE-MS (2.5 mug mL-1) tarafından bağımsız on-line sindirim ve AA-SPE-CE-MS (0.2 mug mL-1) tarafından on-line prekonsantrasyon için olduğundan 125 ve 10 kat daha düşüktü. AA-SPE-IMER-CE-MS'nin tekrarlanabilirliği yeterliydi (0.5 kupa mL-1'de,% RSD, zirve alanları için 3.7 ila %16.9 ve triptik peptidlerin göç süreleri için 3.5 ila %7.7 arasında değişiyordu) ve değiştirilmiş kılcal, IMER-CE-MS'ye benzer şekilde optimum performansla 10 analize kadar yeniden kullanılabilir. Bu yöntem daha sonra kırmızı kan hücresi lizatlarından endojen alfa-sin analizine uygulandı. On alfa-sin triptik peptid tespit edildi (kapsamın %83,3'ü), kan alfa-sin'in (yani N-terminal asetilasyon) translasyon sonrası modifikasyonlarının karakterizasyonu ve lokalizasyonu sağlandı.
Özgün kaynak özetini okuyun
In this paper, we present a fully integrated valve-free method for the sensitive targeted bottom-up analysis of proteins through on-line aptamer affinity solid-phase extraction and immobilized enzyme microreactor capillary electrophoresis-mass spectrometry (AA-SPE-IMER-CE-MS). The method was developed analyzing α-synuclein (α-syn), which is a protein biomarker related to different neurodegenerative disorders, including Parkinson's disease. Under optimized conditions, on-line purification and preconcentration of α-syn, enzymatic digestion, electrophoretic separation, and identification of the tryptic peptides by mass spectrometry was achieved in less than 35 min. The limit of detection was 0.02 μg mL-1 of digested protein (66.7% of coverage, i.e., 8 out of 12 expected tryptic peptides were detected). This value was 125 and 10 times lower than for independent on-line digestion by IMER-CE-MS (2.5 μg mL-1) and on-line preconcentration by AA-SPE-CE-MS (0.2 μg mL-1). The repeatability of AA-SPE-IMER-CE-MS was adequate (at 0.5 μg mL-1,% RSD ranged from 3.7 to 16.9% for peak areas and 3.5 to 7.7% for migration times of the tryptic peptides), and the modified capillary could be reused up to 10 analyses with optimum performance, similarly to IMER-CE-MS. The method was subsequently applied to the analysis of endogenous α-syn from red blood cell lysates. Ten α-syn tryptic peptides were detected (83.3% of coverage), enabling the characterization and localization of post-translational modifications of blood α-syn (i.e., N-terminal acetylation).
Bilimsel değerlendirme
Araştırma sorusu
Sorunun kapsamı orijinal çalışma üzerinden değerlendirilir.
Yöntem ve örneklem
Çalışma tasarımı ve örneklem için kaynak makaleyi kontrol edin.
Temel bulgular
Bu kayıt için editoryal olarak onaylanmış bulgu özeti henüz yayımlanmadı.
Sınırlılıklar
Sonuçların genellenebilirliği, yanlılık ve klinik anlamı ayrıca incelenmelidir.
Bibliyografik veriden yöntem, örneklem veya klinik sonuç çıkarımı yapılmaz.