Studies on alpha-synuclein and islet amyloid polypeptide interaction.

Araştırma özeti

Kaynak özetin Türkçe makine çevirisi. Klinik kullanım öncesinde özgün yayınla karşılaştırılmalı; hekim incelemesi değildir. cc by

Giriş: Parkinson hastalığı ve tip 2 diyabet, patogenezlerinde yerel amiloid birikimin her iki unsuruna da sahiptir. Parkinson hastalığında alfa-sinüklein (aSyn) beyin nöronlarında çözünmez Lewy cisimleri ve Lewy neuritleri oluşturur ve tip 2 diyabette adacık amiloid polipeptid (IAPP) Langerhans adacıklarındaki amiloidi içerir. Bu çalışmada, aSyn ve IAPP arasındaki etkileşimi hem ex vivo hem de in vitro insan pankreas dokularında değerlendirdik. Gereç ve Yöntemler: Antikor bazlı tespit teknikleri, yakınlık ligasyonu tahlili (PLA) ve immüno-TEM birlikte lokalizasyon çalışmaları için kullanılmıştır. Bifluoresans tamamlayıcısı (BiFC) HEK 293 hücrelerinde IAPP ve aSyn arasındaki etkileşim çalışmaları için kullanılmıştır. Thioflavin T tahlili, IAPP ve aSyn arasındaki çapraz tohumlama çalışmaları için kullanılmıştır. Asyn siRNA ile regüle edildi ve insülin sekresyonu TIRF mikroskobu kullanılarak izlendi. Bulgular: ASyn'in hücre içi eş lokalizasyonunu IAPP ile gösterirken, aSyn hücre dışı amiloid yataklarında yoktur. Asin reaktivitesi, beta-hücrelerinin salgı granüllerinde ve insan adacıklarındaki bazı alfa-hücrelerinde bulunur. HEK293 hücrelerinde aSyn / aSyn ve IAPP / IAPP'nin BiFC ifadesi sırasıyla% 29,3 ve% 19,7 floresan hücrelerle sonuçlanırken, aSyn / IAPP ortak ifadesi% 10 floresan hücrelerle sonuçlandı. Önceden oluşturulmuş aSyn fibrilleri in vitro olarak IAPP fibril oluşumunu tohumladı, ancak önceden oluşturulmuş IAPP tohumlarını aSyn'e eklemek aSyn fibrilasyonunu değiştirmedi. Buna ek olarak, monomerik aSyn ile monomerik IAPP'nin karıştırılması, IAPP fibril oluşumunu etkilemedi. Son olarak, endojen aSyn'in nakavt edilmesi beta hücre işlevini veya canlılığını etkilemedi, aSyn'in aşırı ekspresyonu da beta hücre canlılığını etkilemedi. Tartışma: Beta hücrelerinde aSyn ve IAPP'nin yakınlığına ve önceden oluşturulmuş aSyn fibrillerinin in vitro tohumlama kapasitesine rağmen, iki molekül arasındaki bir etkileşimin tip 2 diyabet için patojenik önemi olup olmadığı hala açık bir sorudur.

Özgün kaynak özetini okuyun

Introduction: Parkinson's disease and type 2 diabetes have both elements of local amyloid depositions in their pathogenesis. In Parkinson's disease, alpha-synuclein (aSyn) forms insoluble Lewy bodies and Lewy neurites in brain neurons, and in type 2 diabetes, islet amyloid polypeptide (IAPP) comprises the amyloid in the islets of Langerhans. In this study, we assessed the interaction between aSyn and IAPP in human pancreatic tissues, both ex vivo and in vitro. Material and Methods: The antibody-based detection techniques, proximity ligation assay (PLA), and immuno-TEM were used for co-localization studies. Bifluorescence complementation (BiFC) was used for interaction studies between IAPP and aSyn in HEK 293 cells. The Thioflavin T assay was used for studies of cross-seeding between IAPP and aSyn. ASyn was downregulated with siRNA, and insulin secretion was monitored using TIRF microscopy. Results: We demonstrate intracellular co-localization of aSyn with IAPP, while aSyn is absent in the extracellular amyloid deposits. ASyn reactivity is present in the secretory granules of β-cells and some α-cells in human islets. The BiFC-expression of aSyn/aSyn and IAPP/IAPP in HEK293 cells resulted in 29.3% and 19.7% fluorescent cells, respectively, while aSyn/IAPP co-expression resulted in ∼10% fluorescent cells. Preformed aSyn fibrils seeded IAPP fibril formation in vitro, but adding preformed IAPP seeds to aSyn did not change aSyn fibrillation. In addition, mixing monomeric aSyn with monomeric IAPP did not affect IAPP fibril formation. Finally, the knockdown of endogenous aSyn did not affect β cell function or viability, nor did overexpression of aSyn affect β cell viability. Discussion: Despite the proximity of aSyn and IAPP in β-cells and the detected capacity of preformed aSyn fibrils to seed IAPP in vitro, it is still an open question if an interaction between the two molecules is of pathogenic significance for type 2 diabetes.

Bilimsel değerlendirme

Araştırma sorusu

Sorunun kapsamı orijinal çalışma üzerinden değerlendirilir.

Yöntem ve örneklem

Çalışma tasarımı ve örneklem için kaynak makaleyi kontrol edin.

Temel bulgular

Bu kayıt için editoryal olarak onaylanmış bulgu özeti henüz yayımlanmadı.

Sınırlılıklar

Sonuçların genellenebilirliği, yanlılık ve klinik anlamı ayrıca incelenmelidir.

Bibliyografik veriden yöntem, örneklem veya klinik sonuç çıkarımı yapılmaz.