VPS35 Deficiency Markedly Reduces the Proliferation of HEK293 Cells.

Araştırma özeti

Kaynak özetin Türkçe makine çevirisi. Klinik kullanım öncesinde özgün yayınla karşılaştırılmalı; hekim incelemesi değildir. cc by

Arka plan/objektörler: Retromer protein kompleksi, özellikle endozomal kaçakçılık olmak üzere çeşitli fizyolojik süreçlerde yer alır ve disregülasyonu Alzheimer hastalığı ve Parkinson hastalığı ile birlikte VPS35 nakavt (KO) ile ilişkilendirilerek erken embriyonik ölümlere neden olmuştur. VPS35 eksikliğinin hücresel sonuçlarını araştırmayı amaçladık. Yöntemler: VPS35 kaybının etkilerini araştırmak için, VPS35 KO insan embriyonik böbrek 293 (HEK293) hücreleri oluşturmak için CRISPR/Cas9 kullandık. Retromer bileşen ekspresyonu, hücre proliferasyonu, apoptoz ve mitokondriyal dinamiklerdeki değişiklikleri Batı lekeleme, terminal deoksinükleotidil transferaz dUTP nick son etiketleme (TUNEL) tahlili ve konfokal mikroskopi kullanarak analiz ettik. Sonuçlar: VPS35 KO, hücre proliferasyonunda önemli bir azalmaya ve her ikisi de retromer karmaşık montajı için gerekli olan VPS29 ve VPS26'nın ekspresyonunun azalmasına yol açtı. Sonuç olarak, retromer oluşumu bozulmuştur. Kontrol hücrelerine kıyasla, KO hücreleri yüksek seviyelerde parçalanmış kaspaz-3, poli (ADP-riboz) polimeraz, sitokrom C ve p21, Ki-67, CDK4 ve siklin D ekspresyonu azalmıştır. Ek olarak, VPS35 silme, mitokondriyal fisyonla ilişkili proteinlerin artan ekspresyonu ile ilişkili mitokondriyal parçalanmayı da teşvik etti. Son olarak, insan VPS35 genini kullanan kurtarma deneyi, VPS35'in geri kazanımının sadece retromeri oluşturan temel elementlerin geri kazanılmasına değil, aynı zamanda hücre döngüsüyle ilgili moleküllerin de iyileşmesine yol açtığını ve hücre ölümünü normal bir seviyeye geri getirdiğini doğruladı. Sonuç: Bu bulgular, VPS35'in apoptozu, mitokondriyal dinamikleri ve hücre döngüsü ilerlemesini modüle ederek hücre büyümesi ve hayatta kalmasında kritik bir rol oynadığını göstermektedir.

Özgün kaynak özetini okuyun

Background/Objectives: The retromer protein complex is involved in various physiological processes, especially endosomal trafficking, and its dysregulation has been linked to Alzheimer's disease and Parkinson's disease, as well as VPS35 knockout (KO), causing early embryonic lethality. We aimed to investigate the cellular consequences of VPS35 deficiency. Methods: To investigate the effects of VPS35 loss, we used CRISPR/Cas9 to generate VPS35 KO human embryonic kidney 293 (HEK293) cells. We analyzed changes in retromer component expression, cell proliferation, apoptosis, and mitochondrial dynamics using Western blotting, terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick end labeling (TUNEL) assay, and confocal microscopy. Results: VPS35 KO led to a significant reduction in cell proliferation and decreased expression of VPS29 and VPS26, both essential for retromer complex assembly. Consequently, retromer formation was impaired. Compared to control cells, KO cells exhibited elevated levels of cleaved caspase-3, poly(ADP-ribose) polymerase, cytochrome C, and p21, while the expression of Ki-67, CDK4, and cyclin D was reduced. Additionally, VPS35 deletion also promoted mitochondrial fragmentation, associated with increased expression of mitochondrial fission-related proteins. Finally, the rescue experiment using the human VPS35 gene confirmed that the recovery of VPS35 not only led to the recovery of the essential elements constituting the retromer but also the recovery of molecules related to the cell cycle, restoring cell death to a normal level. Conclusions: These findings suggest that VPS35 plays a critical role in cell growth and survival by modulating apoptosis, mitochondrial dynamics, and cell cycle progression.

Bilimsel değerlendirme

Araştırma sorusu

Sorunun kapsamı orijinal çalışma üzerinden değerlendirilir.

Yöntem ve örneklem

Çalışma tasarımı ve örneklem için kaynak makaleyi kontrol edin.

Temel bulgular

Bu kayıt için editoryal olarak onaylanmış bulgu özeti henüz yayımlanmadı.

Sınırlılıklar

Sonuçların genellenebilirliği, yanlılık ve klinik anlamı ayrıca incelenmelidir.

Bibliyografik veriden yöntem, örneklem veya klinik sonuç çıkarımı yapılmaz.