NeuralCipher Araştırma özeti
Kaynak özetin Türkçe makine çevirisi. Klinik kullanım öncesinde özgün yayınla karşılaştırılmalı; hekim incelemesi değildir. cc by
Vektör ekspresyonu bakterileri Escherichia coli'den lipopolisakkarit (LPS) kirleticisinin varlığı, Parkinson hastalığının nöropatogenezinde yer alan önemli bir protein olan rekombinant alfa-sinüklein (alfaS) in vitro fibrilasyonunu hızlandırmaktan sorumlu bir faktör olarak tanımlandı. Burada, LPS'nin Triton X-114 kullanarak faz ayrımına dayalı alfaS örneklerinden çıkarılması için etkili bir protokol tanımlıyoruz. Önemli olarak, bu yöntem, değiştirilmiş polimiksin B'nin afinite matrisini kullanarak LPS'yi ticari olarak mevcut protokolden daha uygun, daha hızlı ve daha ucuzdu. Endotoksinsiz alfaS (alfaSLPS içermeyen) ve yaygın olarak kullanılan bir yöntem (alfaSc) ile saflaştırılan protein, fibrilasyon kinetiği, agregaların mikroyapısı ve bazı fibrilasyon inhibitörlerine duyarlılıkları açısından değerlendirildi. Monomerik alfaSc ve alfaSLPS-free, fibrilasyon sürecinin modülatörlerine oldukça farklı duyarlılık gösterir, fibriller atomik kuvvet mikroskopi analizine göre benzer morfolojilere ve kalınlığa sahip olmasına rağmen. AlphaSc'nin aksine, alfaSLPS içermeyen fibrilasyon, düşük miktarda rosmarinik asit veya baicalein konsantrasyonlarına zayıf bir şekilde inhibe edildi. Öte yandan, alfaSLPS içermeyen, ancak alfaSc değil, fibrilasyonunu harman ve rifampicin ile hızlandırdı. Toplu olarak, bu sonuçlar, LPS'nin varlığının fibrilasyon modülatörlerinin in vitro taramasıyla ilgili eserler üretebileceğini vurgulamaktadır.
Özgün kaynak özetini okuyun
The presence of lipopolysaccharide (LPS) contaminant from the vector expression bacteria Escherichia coli was described as a factor responsible for accelerating the in vitro fibrillation of recombinant α-synuclein (αS), a key protein involved in the neuropathogenesis of Parkinson's disease. Herein, we describe an efficient protocol for the removal of LPS from αS samples based on phase separation using Triton X-114. Importantly, this method was more feasible, faster and cheaper in eliminating LPS than the commercially available protocol using an affinity matrix of modified polymyxin B. Endotoxin-free αS (αSLPS-free) and the protein purified by a commonly used method (αSc) were evaluated in terms of the kinetics of fibrillation, the microstructure of the aggregates and their susceptibility to certain inhibitors of fibrillation. Monomeric αSc and αSLPS-free exhibit quite different susceptibility to modulators of the fibrillation process, despite their fibrils having similar morphologies and thickness according to the atomic force microscopy analysis. Unlike αSc, the fibrillation of αSLPS-free was poorly inhibited to low concentrations of rosmarinic acid or baicalein. On the other hand, αSLPS-free, but not αSc, had its fibrillation accelerated by harman and rifampicin. Collectively, these results highlight that the presence of LPS might generate artefacts regarding the in vitro screening of fibrillation modulators.
Bilimsel değerlendirme
Araştırma sorusu
Sorunun kapsamı orijinal çalışma üzerinden değerlendirilir.
Yöntem ve örneklem
Çalışma tasarımı ve örneklem için kaynak makaleyi kontrol edin.
Temel bulgular
Bu kayıt için editoryal olarak onaylanmış bulgu özeti henüz yayımlanmadı.
Sınırlılıklar
Sonuçların genellenebilirliği, yanlılık ve klinik anlamı ayrıca incelenmelidir.
Bibliyografik veriden yöntem, örneklem veya klinik sonuç çıkarımı yapılmaz.