NeuralCipher Araştırma özeti
Kaynak özetin Türkçe makine çevirisi. Klinik kullanım öncesinde özgün yayınla karşılaştırılmalı; hekim incelemesi değildir. cc by
Protein alfa-sinükleinin (aSyn) çözünmez agrega formu Parkinson Hastalığı gibi sinükleinopatilerle ilişkilidir, bu nedenle bu başlangıçta çözünen proteinin neden ve nasıl yanlış katlandığını anlamak için büyük çaba harcanır. ASyn'in başlangıç durumu, örneğin kirleticilerin, addüctlerin, oligomerlerin veya bozunma ürünlerinin varlığı, bir tahlilin sonucunu büyük ölçüde etkileyebilir, örneğin agregasyon kinetiğinin belirlenmesi gibi. Burada, rekombinant aSyn'in E. coli'den kaynatılarak izole edilmesi için yaygın olarak kullanılan dört protokolü karşılaştırıyoruz, asit yağışı, amonyum sülfat yağışı ve periplazmik lizi ve ardından iyon değişim kromatografisi ve jel filtrasyonu. Farklı olarak çıkarılan aSyn numunelerinin denatüre olmayan elektrospray iyonizasyon kütle spektrometrisini kullanarak, aSyn'in asit yağışı ve periplazmik lizi ile izole edildiği, sırasıyla% 100 ve% 96.5 monomerin en yüksek yüzdesini elde ettiğini belirledik. aSyn saflığı, asit yağışı ve periplazmik lizis ile izole edilen numunelerde tekrar en yüksekti, ancak agregasyon assayları, agregasyon dörtlüasyon yöntemleri ile agregasyon oranlarında farklılıklar gösterdi. Hızlı bir protokolü vurgular; ifade günü bir, iki adım saflaştırma günü iki. Periplazmik liz bazlı protokol %95 saf asyn vermiştir. Asit çökeltisi ve periplazmik liz bazlı protokoller, sırasıyla% 100 ve% 96,5 oranında monomerik aSyn'in en yüksek oranını vermiştir.
Özgün kaynak özetini okuyun
The insoluble aggregated form of the protein alpha-synuclein (aSyn) is associated with synucleinopathies, such as Parkinson’s Disease, therefore great effort is put into understanding why and how this initially soluble protein misfolds. The initial state of aSyn, e.g. presence of contaminants, adducts, oligomers or degradation products, can greatly influence the outcome of an assay, such as determining its aggregation kinetics. Here, we compare four commonly used protocols for the isolation of recombinant aSyn from E. coli by boiling, acid precipitation, ammonium sulphate precipitation and periplasmic lysis followed by ion exchange chromatography and gel filtration. We identified, using non-denaturing electrospray ionisation mass spectrometry of the differently extracted aSyn samples, that aSyn isolated by acid precipitation and periplasmic lysis yielded the highest percentage of monomer, 100% and 96.5% respectively. aSyn purity was again highest in samples isolated by acid precipitation and periplasmic lysis, yet aggregation assays displayed differences in the aggregation rate of aSyn isolated by all four methods. Highlights A rapid protocol; expression day one, two step purification day two. The periplasmic lysis-based protocol yielded 95% pure aSyn. Acid precipitation and periplasmic lysis-based protocols yielded the highest proportion of monomeric aSyn at 100% and 96.5%, respectively.
Bilimsel değerlendirme
Araştırma sorusu
Sorunun kapsamı orijinal çalışma üzerinden değerlendirilir.
Yöntem ve örneklem
Çalışma tasarımı ve örneklem için kaynak makaleyi kontrol edin.
Temel bulgular
Bu kayıt için editoryal olarak onaylanmış bulgu özeti henüz yayımlanmadı.
Sınırlılıklar
Sonuçların genellenebilirliği, yanlılık ve klinik anlamı ayrıca incelenmelidir.
Bibliyografik veriden yöntem, örneklem veya klinik sonuç çıkarımı yapılmaz.