NeuralCipher Araştırma özeti
Kaynak özetin Türkçe makine çevirisi. Klinik kullanım öncesinde özgün yayınla karşılaştırılmalı; hekim incelemesi değildir. cc by
Abstract Background: Alfa-sinüklein (alfa-syn) agregasyonu, Parkinson hastalığı (PD), Lewy cisimleri (DLB) ve çoklu sistem atrofisi (MSA) dahil olmak üzere çoklu nörodejeneratif bozukluklara dahil edilmiştir. Son zamanlarda, alfa-sin'e karşı rekombinant antikor parçaları (Fab, scFvs ve diabodlar) daha küçük boyut ve daha yüksek stabilite, özgüllük ve afinite gibi avantajları nedeniyle immünoterapik yaklaşımlardaki geleneksel tam uzunlukta antikora alternatif olarak ortaya çıkmıştır. Bununla birlikte, rekombinant antikor parçalarının çoğu, saflaştırılmasını son derece zorlu hale getiren inklüzyon organları (IB'ler) olarak ifade edilme eğilimindedir. Bulgular: Mevcut çalışmada, patojenik alfa-syn fibrillerini hedef alan tek zincirli değişken parça (scFv-F) antikoru E.coli'de tasarlanmış ve ifade edilmiştir. İfade edilen scFv-F'nin çoğunluğu, IB'ler olarak çözünmeyen agregalarda birikmiştir. Aktif proteini elde etmek için scFv-F içeren IB'leri çözündürmek için çeşitli hafif ve sert çözünen koşullar test edildi. İkincil yapı ve biyoaktiviteyi korumak için, IB'leri çözmek için 100 mM Tris, 2 M üre ile pH 12.5 içeren hafif bir çözünen protokol seçildi. Daha sonra üreyi çıkarmak ve aktif scFv-F elde etmek için yavaş on-column refolding yöntemi kullanılmıştır. Homoloji modellemesi kullanılarak üç boyutlu (3D) bir model inşa edildi ve bilinen alfa-sin yapısı ile moleküler kenetlenmeye tabi tutuldu. Potansiyel bağlama cebini tanımlamak için yapısal hizalama yapıldı. Sonuç: ScFv-F böylece saflaştırılmış monomerlere kıyasla alfa-sin fibrillere karşı yüksek özgüllük göstermiştir. Moleküler modelleme çalışmaları, scFv-F'nin diğer bilinen scFv'lerle aynı yapısal topolojiyi paylaştığını göstermektedir. ScFv-F'nin alfa-sin C-terminal bölgesine bağlandığına dair yapısal kenetlenme ve hizalama yoluyla kanıtlar sunuyoruz. Sonuç olarak, yavaş on-column refolding ardından hafif çözünebilirlik, IB'lerden gelen çözünmez proteinler ve / veya antikor moleküllerini içeren hastalıkları saflaştırmak için sert bir genelleştirilmiş ve verimli bir yöntem olarak kullanılabilir.
Özgün kaynak özetini okuyun
Abstract Background: Aggregation of α-synuclein (α-syn) has been implicated in multiple neurodegenerative disorders including Parkinson’s disease (PD), dementia with Lewy bodies (DLB) and multiple system atrophy (MSA), collectively grouped as synucleinopathies. Recently, recombinant antibody fragments (Fab, scFvs and diabodies) against α-syn have emerged as an alternative to the traditional full-length antibody in immunotherapeutic approaches owing to their advantages including smaller size and higher stability, specificity and affinity. However, most of the recombinant antibody fragments tend to be expressed as inclusion bodies (IBs) making its purification extremely challenging. Results: In the current study, a single-chain variable fragment (scFv-F) antibody, targeting the pathogenic α-syn fibrils, was engineered and expressed in E.coli. Majority of the expressed scFv-F accumulated in insoluble aggregates as IBs. A variety of mild and harsh solubilizing conditions were tested to solubilize IBs containing scFv-F to obtain the active protein. To preserve secondary structure and bioactivity, a mild solubilizing protocol involving 100 mM Tris, pH 12.5 with 2 M urea was chosen to dissolve IBs. Slow on-column refolding method was employed to subsequently remove urea and obtain active scFv-F. A three-dimensional (3D) model was built using homology modeling and subjected to molecular docking with the known α-syn structure. Structural alignment was performed to delineate the potential binding pocket. Conclusion: The scFv-F thus purified demonstrated high specificity towards α-syn fibrils compared to monomers. Molecular modeling studies suggest that scFv-F shares the same structural topology with other known scFvs. We present evidence through structural docking and alignment that scFv-F binds to α-syn C-terminal region. In conclusion, mild solubilization followed by slow on-column refolding can be utilized as a generalized and efficient method for hard to purify disease relevant insoluble proteins and/or antibody molecules from IBs.
Bilimsel değerlendirme
Araştırma sorusu
Sorunun kapsamı orijinal çalışma üzerinden değerlendirilir.
Yöntem ve örneklem
Çalışma tasarımı ve örneklem için kaynak makaleyi kontrol edin.
Temel bulgular
Bu kayıt için editoryal olarak onaylanmış bulgu özeti henüz yayımlanmadı.
Sınırlılıklar
Sonuçların genellenebilirliği, yanlılık ve klinik anlamı ayrıca incelenmelidir.
Bibliyografik veriden yöntem, örneklem veya klinik sonuç çıkarımı yapılmaz.