NeuralCipher Araştırma özeti
Kaynak özetin Türkçe makine çevirisi. Klinik kullanım öncesinde özgün yayınla karşılaştırılmalı; hekim incelemesi değildir. cc by
Özet Lösin bakımından zengin tekrar kinaz 2 (LRRK2) ve Rab substratlarının fosforilasyon seviyeleri hastalık veya farmakodinamik biyobelirteç olarak kullanım potansiyeline sahiptir. S910-S935-S955-S973 fosfozitlerdeki LRRK2 fosforilasyon seviyeleri, çoğu hastalık mutantı LRRK2 formları için azalırken, fosfo-S1292 için fosfo-T72-Rab8 ve fosfo-T73-Rab10 seviyeleri çoğu mutant için artırılmaktadır. Buna ek olarak, LRRK2'deki bu 5 fosfositin tümü, potansiyel terapötikler olarak kabul edilen LRRK2 inhibitör tedavisi üzerine hızla defosforilize edilir. Bu çalışmanın temel amacı, lösin bakımından zengin tekrar kinaz 2 (LRRK2) ve Rab8/10'u insan, insan olmayan primat ve sıçan idrarında potansiyel hastalık veya farmakodinamik biyobelirteç olarak kullanmak üzere karakterize etmektir. İnsan deneklerinden ve hayvanlardan toplanan idrarla, küçük hücre dışı vezikülleri (EV'leri) izole etmek için ultrasantrifügasyon bazlı bir fraksiyon protokolü uyguladık. Üriner EV'lerde (uEV'lerde) bu LRRK2 ve Rab epitoplarını ölçmek için LRRK2, LRRK2 fosforilasyon bölgelerinin yanı sıra Rab8 ve Rab10 toplam ve fosforile proteinlerine yönelik antikorlarla western blot kullandık. İnsan ve insan olmayan primat (NHP) uEV'lerde LRRK2 ve Rab8/10'un varlığını, toplam LRRK2'nin yanı sıra LRRK2 pS910, pS935, pS955, pS973, pS1292 ve fosforile Rab8 ve Rab10'un fosforile formları da dahil olmak üzere onaylıyoruz. Ayrıca LRRK2 ve Rab ifadesini kemirgen uEV'lerde onaylıyoruz. İnsan kohortlarında LRRK2 ve Rab epitoplarını ölçtük ve ilk kohortta LRRK2 G2019S mutasyonunu taşıyan bireylerde pS1292-LRRK2 seviyelerinin yükseldiğini, ancak LRRK2 G2019S taşıyıcıları için olsun ya da olmasın, sağlıklı ve PD grupları arasında önemli ölçüde farklılık göstermediğini gördük. İkinci bir kohortta, PD'nin Rab8 seviyelerinde bir artış ve S910-LRRK2 ve S935-LRRK2 fosforilasyon oranlarında bir azalma ile ilişkili olduğunu bulduk. Hayvanlarda, LRRK2 kinaz inhibitörü ile yapılan akut tedavinin Rab10 fosforilasyon oranlarında azalmaya ve NHP'lerden uEV'lerde pS935-LRRK2 oranlarında azalmaya yol açtığını bulduk. PD hastalarının üEV'lerindeki heterolog fosforilasyon bölgelerinde LRRK2 fosforilasyondaki değişikliklerin tanımlanması, uEV'lerde PD biyobelirteçlerinin kaynağı olarak LRRK2-Rab yolunun potansiyelini daha da pekiştirmektedir.
Özgün kaynak özetini okuyun
Abstract Levels of expression or of phosphorylation of leucine-rich repeat kinase 2 (LRRK2) and its Rab substrates have the potential for use as disease or pharmacodynamic biomarkers. LRRK2 phosphorylation levels at the S910-S935-S955-S973 phosphosites are reduced for most disease mutant forms of LRRK2, while for phospho-S1292, phospho-T72-Rab8 and phospho-T73-Rab10 levels are increased for most mutants. In addition, all of these 5 phosphosites on LRRK2 are rapidly dephosphorylated upon LRRK2 inhibitor treatment, considered potential therapeutics. The main objective of this study is therefore to characterize leucine-rich repeat kinase 2 (LRRK2) and Rab8/10 in human, non-human primate and rat urine for use as potential disease or pharmacodynamic biomarkers. With urine collected from human subjects as well as animals, we have applied an ultracentrifugation based fractionation protocol to isolate small extracellular vesicles (EVs). We used western blot with antibodies directed against LRRK2, LRRK2 phosphorylation sites as well as Rab8 and Rab10 total and phosphorylated proteins in order to measure these LRRK2 and Rab epitopes in urinary EVs (uEVs). We confirm the presence of LRRK2 and Rab8/10 in human and non-human primate (NHP) uEVs, including total LRRK2 as well phosphorylated forms of LRRK2 pS910, pS935, pS955, pS973, pS1292 and phosphorylated Rab8 and Rab10. We also confirm LRRK2 and Rab expression in rodent uEVs. We quantified LRRK2 and Rab epitopes in human cohorts and found in a first cohort that pS1292-LRRK2 levels were elevated in individuals carrying the LRRK2 G2019S mutation, but did not differ significantly between healthy and PD groups, whether for LRRK2 G2019S carriers or not. In a second cohort, we found that PD was associated to an increase in Rab8 levels and a decrease in S910-LRRK2 and S935-LRRK2 phosphorylation rates. In animals, we found that acute treatment with LRRK2 kinase inhibitor led to decreases in Rab10 phosphorylation rates and to a decrease in pS935-LRRK2 rates in uEVs from NHPs. The identification of changes in LRRK2 phosphorylation at heterologous phosphorylation sites in uEVs of PD patients further reinforces the potential of the LRRK2-Rab pathway as a source of PD biomarkers in uEVs.
Bilimsel değerlendirme
Araştırma sorusu
Sorunun kapsamı orijinal çalışma üzerinden değerlendirilir.
Yöntem ve örneklem
Çalışma tasarımı ve örneklem için kaynak makaleyi kontrol edin.
Temel bulgular
Bu kayıt için editoryal olarak onaylanmış bulgu özeti henüz yayımlanmadı.
Sınırlılıklar
Sonuçların genellenebilirliği, yanlılık ve klinik anlamı ayrıca incelenmelidir.
Bibliyografik veriden yöntem, örneklem veya klinik sonuç çıkarımı yapılmaz.