NeuralCipher Araştırma özeti
Kaynak özetin Türkçe makine çevirisi. Klinik kullanım öncesinde özgün yayınla karşılaştırılmalı; hekim incelemesi değildir. cc by
Leucine Rich Repeat Kinaz 2 (LRRK2)'deki mutasyonların aktifleştirilmesi Parkinson hastalığına neden olur. LRRK2, Rab GTPases'in bir alt kümesini, özellikle Rab10 ve Rab8A'yı fosforile eder ve daha önce fosfoRabs'ın LRRK2 membran işe alımı ve aktivasyonunda önemli bir rol oynadığını gösterdik (Vides et al., 2022). LRRK2 yol düzenlemesi hakkında daha fazla bilgi edinmek için, hücresel fosfoRab10 seviyelerinin değiştiricilerini tanımlamak için tarafsız, CRISPR tabanlı genom çapında bir ekran gerçekleştirdik. Benzersiz CRISPR kılavuz dizilerini barındıran fare NIH-3T3 hücrelerinin havuzlarındaki fosfoRab10 seviyelerindeki değişiklikleri tespit etmek için bir akış sitometrisi tahlili geliştirilmiştir. Çoklu negatif ve pozitif düzenleyiciler tespit edildi; şaşırtıcı bir şekilde, Rab12 geninin nakavt edilmesi, özellikle çoklu hücre tiplerinde ve nakavt fare dokularında fosfoRab10 seviyelerinin azaltılmasında etkili oldu. fosfoRab10'daki Rab güdümlü artışlar Rab12, LRRK2 bağımlı ve PPM1H fosfataz geri dönüşümlü için spesifikti; vahşi tip ve patojenik G2019S ve R1441C LRRK2 ile görüldüler. AlphaFold modelleme, LRRK2 Armadillo etki alanında Rab12 bağlayıcı bir site ortaya çıkardı ve bu sitede Rab12 etkileşimi için gerekli olduğu tahmin edilen kalıntıların, LRRK2'nin Rab29 aktivasyonundan farklı bir şekilde genel fosfoRab seviyelerini etkilediğini gösteriyoruz. Verilerimiz, Rab12'nin LRRK2 Armadillo etki alanındaki yeni bir siteye bağlanmasının, Rab fosforilasyon için LRRK2 kinazını aktive ettiği ve kinaz etki alanını hedeflemeyen yeni bir LRRK2 inhibitörleri sınıfı için yeni bir terapötik hedef olarak hizmet edebileceği bir modeli desteklemektedir.
Özgün kaynak özetini okuyun
Activating mutations in the Leucine Rich Repeat Kinase 2 (LRRK2) cause Parkinson’s disease. LRRK2 phosphorylates a subset of Rab GTPases, particularly Rab10 and Rab8A, and we showed previously that phosphoRabs play an important role in LRRK2 membrane recruitment and activation (Vides et al., 2022). To learn more about LRRK2 pathway regulation, we carried out an unbiased, CRISPR-based genome-wide screen to identify modifiers of cellular phosphoRab10 levels. A flow cytometry assay was developed to detect changes in phosphoRab10 levels in pools of mouse NIH-3T3 cells harboring unique CRISPR guide sequences. Multiple negative and positive regulators were identified; surprisingly, knockout of the Rab12 gene was especially effective in decreasing phosphoRab10 levels in multiple cell types and knockout mouse tissues. Rab-driven increases in phosphoRab10 were specific for Rab12, LRRK2 dependent and PPM1H phosphatase reversible; they were seen with wild type and pathogenic G2019S and R1441C LRRK2. AlphaFold modeling revealed a novel Rab12 binding site in the LRRK2 Armadillo domain and we show that residues predicted to be essential for Rab12 interaction at this site influence overall phosphoRab levels in a manner distinct from Rab29 activation of LRRK2. Our data support a model in which Rab12 binding to a new site in the LRRK2 Armadillo domain activates LRRK2 kinase for Rab phosphorylation and could serve as a new therapeutic target for a novel class of LRRK2 inhibitors that do not target the kinase domain.
Bilimsel değerlendirme
Araştırma sorusu
Sorunun kapsamı orijinal çalışma üzerinden değerlendirilir.
Yöntem ve örneklem
Çalışma tasarımı ve örneklem için kaynak makaleyi kontrol edin.
Temel bulgular
Bu kayıt için editoryal olarak onaylanmış bulgu özeti henüz yayımlanmadı.
Sınırlılıklar
Sonuçların genellenebilirliği, yanlılık ve klinik anlamı ayrıca incelenmelidir.
Bibliyografik veriden yöntem, örneklem veya klinik sonuç çıkarımı yapılmaz.